La Puebla del Río aprovecha su condición de Puerta de Doñana desde el Aljarafe para ofertar un recorrido rural que en su mayor parte transcurre por un enclave de alto valor paisajístico.

El itinerario comienza y termina en el núcleo urbano de La Puebla, a los pies del Río Guadalquivir, pero a lo largo de más de sus 21 kms. evoluciona a través de cañadas reales y veredas hasta una zona de eucaliptos, monte mediterráneo y pinares, conocido como Gurugú, para después volver al pueblo. Este paraje de tan alto valor ecológico, por el que trascurre casi la mitad de la prueba, está catalogado como Zona de Especial Conservación Doñana Norte y Oeste, Lugar de Interés Comunitario (LIC) perteneciente a la Red Natura 2000 de la Unión Europea.

Es precisamente la belleza del trazado lo que enamora a los atletas venidos de todos los rincones de Andalucía, pues contrasta su belleza con la dureza de su recorrido, lleno de multitud de cuestas, barrancos de agua y cañadas, formando "trialeras", que dotan a la carrera de una dureza inusual para un lugar tan cerca de la capital sevillana.